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质谱法和Edman降解法N端测序
质谱法和Edman降解法N端测序-详情"几乎所有蛋白质合成都起始于其N-末端，其氨基酸序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着重要作用，因此蛋白质的N-末端序列分析对于生物医药等研究非常关键。蛋白质N-末端测序的两种主要方法是Edman降解（Edman degradation）和质谱法（Mass spectrometry）。质谱法将蛋白消化成5-25个氨基酸的肽，随即通过LC-MS/MS分析检测，将采集的数据与理论序列数据库进行匹配，进而确认N端序列。质谱可以测出
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2023-09-18 |
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Edman转膜PVDF步骤
Edman转膜PVDF步骤-详情"Edman降解法（Edman degradation）测序实验中，经过SDS-PAGE电泳分离后的蛋白质样品需经过“转膜”步骤，从PAGE胶转移到PVDF膜上固定，才能接着使用Edman降解法进行下一步的测序。转膜是将蛋白胶上的样品转移至PVDF膜上，是Edman降解法测序样品准备过程，这是对zuì终的测序结果影响较大的一步，转膜质量的好坏直接决定了测序的数据分析结果。因此，Edman转膜步骤不容忽视。为了防止没有电场的情况下已经分
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2023-09-18 |
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Edman降解无法测修饰
Edman降解无法测修饰-详情"翻译后修饰（PTMs）和翻译后结构的加工只能通过蛋白水平的直接分析来展现，这些对蛋白的研究是迫切需要的。相较于没有发生修饰的蛋白，PTMs会导致特定序列分子量的增加，使得蛋白水平的分析较为困难。Edman降解法（Edman degradation）可对N-末端具有游离α-残基的肽段或蛋白测序，却无法对大多数翻译后修饰的蛋白进行测序。利用Edman化学降解法测序慢，且得到的肽段序列小于60个氨基酸长度，每个氨基酸
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2023-09-18 |
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Edman反应鉴定N端残基
Edman反应鉴定N端残基-详情"Edman降解是从多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程，利用Edman化学反应从蛋白质的N末端将α残基依次降解再对氨基酸进行鉴定。Edman降解方法只能用于鉴定蛋白质和多肽的N-末端氨基酸残基。该方法需要对N端α残基氨基酸进行化学修饰（苯异硫氰酸酯修饰），然后从肽上切割该氨基酸，再经层析或色谱法（如HPLC）鉴定被切割的氨基酸，余下的多肽链（少了一个残基）保持完整并被回收进行下一轮降解循
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2023-09-18 |
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N端残基的鉴定
N端残基的鉴定-详情"氨基酸序列测定是了解蛋白质性质和功能的重要途径，N端区域又是蛋白质及多肽重要的结构和功能部位，其序列特异性很高，通过N端残基的鉴定可以对大多数蛋白质进行鉴定。蛋白N端测序方法主要分为两大类，即质谱技术和非质谱技术，非质谱技术主要是经典的埃德曼（Edman）降解法。质谱法（Mass spectrometry-based sequencing）是一种测量离子质荷比的分析方法。在蛋白测序方面，一级质谱主要是给出目标物的分子量
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2023-09-18 |
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GST pull-down质谱分析
GST pull-down质谱分析-详情"GST pull-down是利用重组技术将探针蛋白与谷胱甘肽-S-转移酶蛋白（glutathione-S-transferase，GST）融合，融合蛋白通过GST与固相化在球珠上的谷胱甘肽（Glutathione，GSH）稳定结合，从而分离出能与融合蛋白相互作用的蛋白的技术。GST-pull down技术主要在体外验证能和已知融合蛋白相互作用的未知蛋白质，或者两种蛋白之间是否有相互作用。其研究对象是已知蛋白质与已知蛋白质的互作验证，或者是已知
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2023-09-18 |
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HCP宿主细胞蛋白
HCP宿主细胞蛋白-详情"宿主细胞蛋白（HCP，Host Cell Protein）是在生物制药（如生产重组蛋白药物、单克隆抗体）工艺过程中所产生的杂质，其超过一定含量则很有可能会引起免疫反应或其他不良反应。因此，HCP残留量检测是抗体药物产品研发与质控中zuì常进行的分析项目，HCP残留数值越低，则产品质控越好。宿主细胞蛋白（HCP）是由宿主细胞产生的与工艺相关的杂质，通常在重组生物制药产品中的含量较低，即使HCP杂质的总含量很低同
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2023-09-18 |
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HCP残留的原因
HCP残留的原因-详情"宿主细胞蛋白(host cell protein，HCP)是指生物制品中来自生产细胞系的蛋白成分，既包括宿主细胞的结构蛋白也包括宿主细胞分泌的促生长因子等，是具有多种生理化学和免疫学特性的复杂混合物，是一种主要的工艺相关杂质。HCP是一类异质性的蛋白污染，是生物制品中无法避免的一类杂质，可能在重组发酵过程中产生，或是从外源物质引入。HCP含量超过一定含量，很有可能会引起免疫反应或其他不良反应。HCP构成了生物
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2023-09-18 |
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